原代細(xì)胞是指從不同機(jī)體（人、大鼠、小鼠、兔子等等）中取出不同的組織進(jìn)行機(jī)械破碎或者各種酶液進(jìn)行消化，分成單個(gè)細(xì)胞后，在體外進(jìn)行細(xì)胞的培養(yǎng)。原代細(xì)胞因?yàn)閬?lái)源機(jī)體組織樣本，所以保留了很多機(jī)體的生理功能，非常適合實(shí)驗(yàn)材料的應(yīng)用研究。在生物研究廣泛的應(yīng)用于，分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、基因組學(xué)、蛋白質(zhì)學(xué)等等。
細(xì)胞培養(yǎng)是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究最常用的手段之一，分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)兩大類。原代培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)，是指由體內(nèi)取出組織或細(xì)胞進(jìn)行的首次培養(yǎng)，適于做細(xì)胞形態(tài)、功能和分化等研究。 細(xì)胞培養(yǎng)要遵循嚴(yán)格的步驟，任何一步的忽視都有可能導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)失敗。
培養(yǎng)方法與步驟，原代細(xì)胞培養(yǎng)具體步驟如下：
1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。
3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青鏈霉素的混合液中浸潤(rùn)2-10分鐘。
4、剪切：用眼科剪把組織切成2-3毫米大小的塊，以便于消化。加入比組織塊總量多3-5倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角燒瓶中，結(jié)扎瓶口或塞以膠塞。
5、消化：用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用恒溫?cái)嚢杵飨?。消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。
6、分離：在消化過(guò)程中見消化液混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過(guò)適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。
7、計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過(guò)大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說(shuō)明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。
8、培養(yǎng)：培養(yǎng)箱要求穩(wěn)定的溫度(37°C)、穩(wěn)定的CO2水平(5%)、較高的相對(duì)飽和濕度(95%)。 原代細(xì)胞培養(yǎng)是成功傳代之前的培養(yǎng)，是建立各種細(xì)胞系（株）必經(jīng)的階段。假如原代培養(yǎng)能夠維持幾小時(shí)甚至更長(zhǎng)，即可進(jìn)行進(jìn)一步篩選。
