實(shí)驗(yàn)背景
裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)，是一種用于研究腫瘤發(fā)生和發(fā)展的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。通過(guò)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)，可以研究腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、藥物治療等方面的情況，為開(kāi)發(fā)新的腫瘤治療方法和藥物提供重要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
實(shí)驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)
①讓一群裸鼠帶有相同腫瘤，生長(zhǎng)速率大致相同，個(gè)體差異較小，存活率高。
②可連續(xù)移植，腫瘤能長(zhǎng)期保留。
③實(shí)驗(yàn)周期較短，實(shí)驗(yàn)條件易于控制。
④對(duì)宿主的影響類似，可以客觀判斷療效。
鼠的品系選擇
實(shí)驗(yàn)常用的是BALB/c-nu裸小鼠，因其無(wú)胸腺，T—淋巴細(xì)胞缺陷，抵抗力低下，常因消耗性疾病而死亡，更宜在SPF環(huán)境內(nèi)飼養(yǎng)。裸鼠在腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、藥品與生物制品的安全性評(píng)價(jià)及有效藥品的篩選等實(shí)驗(yàn)方面，有著特殊的價(jià)值。 實(shí)驗(yàn)通過(guò)在體內(nèi)移植外源性腫瘤細(xì)胞后，由于其免疫系統(tǒng)的不完整，不會(huì)對(duì)異物產(chǎn)生免疫反應(yīng)，因此，腫瘤細(xì)胞可以不受抵抗地存活和生長(zhǎng)。 隨著裸小鼠年齡增長(zhǎng)或有關(guān)因素的影響(如病毒感染),裸鼠體內(nèi)正常T細(xì)胞會(huì)增加，故接種腫瘤實(shí)驗(yàn)一般會(huì)采用4-6周齡的裸鼠。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程
本文以皮下荷瘤實(shí)驗(yàn)為例，將細(xì)胞或組織通過(guò)原位或皮下移植到裸鼠體內(nèi)，使其成瘤。
細(xì)胞準(zhǔn)備
細(xì)胞系選擇：不同的細(xì)胞成瘤能力不同，考慮細(xì)胞成瘤能力和實(shí)驗(yàn)?zāi)康?鼠源細(xì)胞易成瘤，人源細(xì)胞更貼近人類腫瘤。
細(xì)胞復(fù)蘇與擴(kuò)增：取凍存于液氮的腫瘤細(xì)胞復(fù)蘇并擴(kuò)增，確保腫瘤細(xì)胞的活力和較好的生長(zhǎng)狀態(tài)，一般鼠源細(xì)胞：2-100萬(wàn)/只；人源細(xì)胞：200-1000萬(wàn)/只。 最高注射量：結(jié)合細(xì)胞和裸鼠的實(shí)際情況，最高注射1000萬(wàn)/0.1ml，避免細(xì)胞過(guò)飽和。
接種步驟
①胰酶消化細(xì)胞，計(jì)數(shù)后將其重懸于生理鹽水中 。
②選擇進(jìn)針部位（一般選擇腋下或腹股溝等血管豐富的部位），用酒精棉球擦拭。
③向前方穿行，注射前針頭左右動(dòng)一下，若無(wú)阻力則證明在皮下，否則可能在皮內(nèi)或肌肉里面 。
④緩慢推注，一般體積為100-200μL，注射完后緩慢拔出針頭，可在注射部位看到明顯的鼓包 。
⑤接種點(diǎn)離進(jìn)針點(diǎn)盡量遠(yuǎn)一些，防止漏液和污染。
接種后流程
接種后觀察（腫瘤）→成瘤后腫瘤測(cè)量→按方案給藥
結(jié)果處理
一般一周到兩周即可觀察到是否成瘤。成瘤成功后，根據(jù)客戶要求定期測(cè)量，匯集數(shù)據(jù)，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死裸鼠，取出腫瘤，拍照（注意光線，對(duì)焦清晰，放置直尺擺放整齊，用于計(jì)算腫瘤體積，制作帶有各腫瘤體積的EXCEL表）。
常見(jiàn)問(wèn)題
腫瘤長(zhǎng)不出來(lái)是怎么回事？
①細(xì)胞狀態(tài)差，活力不好；
②腫瘤細(xì)胞不易成瘤，需加入Matrigel輔助或增大接種量或更換細(xì)胞系；
③小鼠周齡太大，或小鼠免疫排斥，建議更換免疫缺陷程度更大的小鼠。
腫瘤長(zhǎng)起來(lái)又消失？
腫瘤塊先縮小，后變大很常見(jiàn)，很可能是炎癥反應(yīng)，腫瘤細(xì)胞被小鼠自身吸收，繼續(xù)觀察腫瘤細(xì)胞吸收之后是否經(jīng)過(guò)幾周還能長(zhǎng)出來(lái)，長(zhǎng)不起來(lái)建議換鼠。
腫瘤均一性很差，體積差距較大？
如果荷瘤分組發(fā)現(xiàn)小鼠腫瘤體積差距很大，可能因小鼠個(gè)體差異導(dǎo)致，建議重新分組。
是否可以在一鼠進(jìn)行多個(gè)點(diǎn)荷瘤？
不可以，一只鼠只能接種一個(gè)點(diǎn)，若一只鼠身上有多個(gè)腫瘤塊，可能會(huì)相互影響。
