模型制作方法
栓線的制備:可自己制備或是購(gòu)買(mǎi)從品,自己制備在此不再說(shuō)明,建議購(gòu)買(mǎi),線栓直徑有對(duì)應(yīng)使用的老鼠重量
TTC的配制:用0.2mol/L磷酸緩沖液(PBS)配成2%TTC溶液(pH7.5),避光保存。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:SD大鼠
實(shí)驗(yàn)方法:
(1)動(dòng)物用10%水合氯醛(35mg/kg)腹腔注射麻醉。仰臥位固定,頸正中線切口,沿胸鎖乳突肌內(nèi)緣分離肌肉和筋膜,分離左側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)、頸外動(dòng)脈(ECA)和頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA),在CCA遠(yuǎn)心端和近心端及ECA處掛線備用。
(2)用微動(dòng)脈夾暫時(shí)夾閉ICA,然后近心端結(jié)扎CCA、ECA。然后在距CCA分叉部4mm處剪一小口,將拴線插入到ICA,這時(shí)用繞在CCA遠(yuǎn)心端的細(xì)線輕輕系牢拴線。(不可過(guò)緊,否則近線困難,但松了又會(huì)出血。)用眼科鑷輕推拴線,從血管分叉處開(kāi)始算距離,當(dāng)插入深度在18 mm時(shí)(一定要將血管放松至原來(lái)狀態(tài), 且保證標(biāo)記點(diǎn)在分叉處,由于標(biāo)記的是白色的所以很容易看的),緊緊系牢CCA遠(yuǎn)心端的細(xì)線,此時(shí)的關(guān)鍵是動(dòng)作輕柔,不要使ICA有任何的牽拉,否則栓線會(huì)脫出ACA,可能會(huì)造成缺血失敗。血管外的栓線不要留得過(guò)長(zhǎng),更不要縫在皮外,大鼠醒來(lái)后會(huì)自己拔出。
(3)縫合傷口,單籠飼養(yǎng)觀察。如果需要再灌的話,就把拴線抽出即可,因?yàn)槟X底有個(gè)動(dòng)脈環(huán),結(jié)扎一側(cè)頸總動(dòng)脈大腦不會(huì)缺血的。
注意事項(xiàng):
(1)分離時(shí)要層次清楚:正中剪開(kāi)SD大鼠頸部皮膚,分離皮下結(jié)締組織時(shí)會(huì)發(fā)現(xiàn)該組織與頸部?jī)蓚?cè)鼓泡腺體(很多人誤認(rèn)為那是甲狀腺)結(jié)合緊密,因此不必分離過(guò)于太細(xì),直接在正中兩側(cè)鼓泡腺體之間分離,這樣能不接觸胸鎖乳突肌而直接暴露頸前頸群且不會(huì)損傷腺體造成過(guò)多出血。下一步是分開(kāi)頸前肌群,這時(shí)候要注意用小鉗子作撐開(kāi)分離動(dòng)作要在左右肌肉塊之間而不是一塊肌肉的肌纖維之間,雖然它們看起來(lái)很模糊,但這樣能保證不會(huì)出現(xiàn)較多條索狀細(xì)肌纖維條影響下一步頸內(nèi)動(dòng)脈的尋找與分離,并且能整塊地向一側(cè)牽開(kāi)頸前肌群暴露頸動(dòng)脈鞘。見(jiàn)到頸動(dòng)脈鞘了則要注意細(xì)致分離迷走神經(jīng),若損傷則可能影響其呼吸而死亡的。
(2)分離血管時(shí),要盡量將血管剝離的干凈些,這樣在用眼科剪剪口時(shí)就不會(huì)誤剪外膜(誤剪的話再剪就很容易把口剪大了或者剪斷了,要注意口子越小越好插線),且要剪一個(gè)斜行的切口(眼科剪與血管約成45度),這樣在血液剛流出時(shí)仍能看上翻的斷口管壁,這樣即容易插入栓線且血管受得了插線時(shí)一定的牽拉。當(dāng)然,切勿牽拉過(guò)猛,以免使血管發(fā)生痙攣,導(dǎo)致栓線不能順利進(jìn)入。
(3)注意盡量不要損傷在頸內(nèi)頸外分叉下的交感神經(jīng)節(jié)。
(4)如果你用的是中長(zhǎng)效麻醉劑,插線成功后,固定絲線,然后讓其俯臥位,而且稍稍抬高其頸部,才能確保模型成功。
(5)插入線栓很關(guān)鍵:
栓線進(jìn)入后頸內(nèi)動(dòng)脈后即可逐漸插入了,有時(shí)候很順利一插到底,但有時(shí)候在中間就怎么也進(jìn)不去了,這是因?yàn)樵谘苋腼B穿過(guò)顱骨時(shí)有一個(gè)狹窄或者角度。因此,碰上這種明顯阻力時(shí),一定不能盲目向前使力插,越插栓線前端變形越進(jìn)不去且容易損傷血管。這時(shí)候正確的作法是往外抽出較多栓線,也許會(huì)有一定的動(dòng)脈血流出,不必慌,只要順著血管走行調(diào)整一下進(jìn)線角度輕柔的使勁,一般都能進(jìn)去,反復(fù)試幾次還不行最好換根栓線,很可能前端也經(jīng)變形角度變了!頸內(nèi)動(dòng)脈的走向?yàn)閮?nèi)上方,可以用眼科鑷夾住魚(yú)線插,但進(jìn)去后要注意,別太用力,要不血管就要破了 。
避免插入翼腭一個(gè)小技巧:就是用鑷子夾住線栓給一個(gè)向上的力,保證線栓頂在血管上端,是不會(huì)進(jìn)入到翼腭動(dòng)脈的,多多練習(xí)會(huì)很快插入腦內(nèi)動(dòng)脈的。
(6)栓線不能在血管里反復(fù)進(jìn)退,否則及容易造成蛛網(wǎng)膜下腔出血,,而且很容易誤解為模型成功,因?yàn)檫@時(shí)的神經(jīng)功能改變也很明顯,但并不是由于栓塞引起的。
手術(shù)示意圖:
造模效果圖