實驗原理
通過不同的干預(yù)手段如脂多糖誘導(dǎo)、吸入性損傷、體外循環(huán)心臟手術(shù)等來模擬急性肺損傷的情況，使動物處于全身炎癥反應(yīng)狀態(tài)，刺激機體釋放炎性細(xì)胞因子，從而引起級聯(lián)反應(yīng)，使肺泡上皮細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，引起肺部病變。其中脂多糖模擬法應(yīng)用更為廣泛，目前比較常見的脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷模型制備方法有三種，腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),氣管滴注LPS和盲腸結(jié)扎穿刺(cecal ligation and puncture,CLP)誘導(dǎo)，本文采用腹腔注射脂多糖法制備。
實驗準(zhǔn)備
實驗動物選擇：品類：SD大鼠 性別：雌雄各半 體重：220～300g
實驗試劑及儀器設(shè)備：脂多糖、肺部液體定量霧化器、酶標(biāo)儀、電子天平等
操作步驟
制備周期：1周，根據(jù)實驗需求調(diào)整
實驗分組：隨機分組法，分為正常組、實驗組、恢復(fù)組
制備方法：適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，正常組給予生理鹽水腹腔注射，其余各組腹腔注射聯(lián)合氣道內(nèi)霧化脂多糖誘導(dǎo)ALI 模型，造模后約 2 -3h 大鼠逐漸出現(xiàn)高熱，呼吸急促等表現(xiàn)，造模成功。
后續(xù)實驗
1.造模后，正常組、實驗組采用生理鹽水灌胃；恢復(fù)組給予地塞米松溶液灌胃，分別于 LPS 注射后 0、8、16 h 給藥，共 3 次。
2.LPS 造模 24 h 后，大鼠腹腔注射戊巴比妥麻醉，處死后收集肺組織、血清等樣本。肺組織以 4% 多聚甲醛固定，用于組織學(xué)檢測。
檢測研究評價
HE檢測：可在低倍鏡下觀察到肺組織的炎癥細(xì)胞浸潤、水腫以及損傷，評估肺部損傷分布情況。
免疫組化檢測：檢測肺組織中炎癥因子表達(dá)情況以及關(guān)注的重點信號通路基因表達(dá)情況；
WB檢測：肺組織中關(guān)注的重點信號通路基因表達(dá)情況；
ELISA檢測：血清中炎癥因子的表達(dá)情況。
