服務介紹:
人源細胞接種到裸鼠皮下,成瘤后以此為模型進行疾病發(fā)生機制和藥物篩選的研究。目前腫瘤化療所應用的大多數(shù)藥物,都經(jīng)動物移植性腫瘤試驗而被發(fā)現(xiàn),因此裸鼠皮下瘤模型是篩選抗腫瘤新藥中最常用的模型。
實驗中心:江蘇瀚江生物
實驗動物選擇:BALB/c-nu裸小鼠 ,隨著裸小鼠年齡增長或有關(guān)因素的影響(如病毒感染),裸鼠體內(nèi)正常T細胞會增加,一般采用4--6周齡的裸鼠,體重16-18g左右。
細胞狀態(tài):選擇生長狀態(tài)良好的細胞,處于對數(shù)生長期,密度達到80-90%左右。在收集細胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。
細胞處理:用胰酶消化細胞后,用預冷的PBS洗兩遍,去除殘余血清。然后用PBS或無血清培養(yǎng)基調(diào)整細胞濃度至1-5×10^7個細胞/ml。如有條件,可加入基質(zhì)膠加速瘤塊生成。
接種細胞:盡快將細胞接種到裸鼠皮下,半小時內(nèi)完成。途中將細胞懸液放在冰上保持活性。種植部位選擇血供豐富的區(qū)域,如腋窩中后部。
接種技巧:接種前充分吹散細胞懸液,防止細胞成團。針頭在皮下進針約1cm深,左右滑動幾次,以便細胞接種成團。
固定裸鼠:左手捏緊裸鼠頸背部皮膚,小拇指夾住尾巴。
腫瘤觀察:接種后1-2周可觀察到皮下腫塊。根據(jù)腫瘤細胞特性和接種量,成瘤周期為1-2個月。腫瘤大小不宜超過2000mm3。
腫瘤測量:每周測量兩次腫瘤大小,使用游標卡尺測量最長和最短部位。體積計算公式:V=1/2×a×b2(a為長軸,b為短軸)。
樣本處理:皮下瘤取下后,一部分凍存于液氮中用于提取蛋白和RNA,另一部分用福爾馬林固定用于免疫組化、免疫熒光等實驗。