細(xì)胞凋亡通常稱為細(xì)胞程序性死亡，是由基因控制的主動(dòng)性細(xì)胞死亡過程。越來越多數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞凋亡與多種疾病密切相關(guān)，如癌細(xì)胞具有連續(xù)增殖、抵抗細(xì)胞凋亡能力，利用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡可為腫瘤診斷，療效評(píng)價(jià)和預(yù)后預(yù)測(cè)提供了重要的參考指標(biāo)。
Annexin V和PI雙染法是流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡的經(jīng)典方法，它是基于凋亡的早期細(xì)胞膜上的磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine, PS）從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面這一原理來實(shí)現(xiàn)的。
Annexin Ⅴ（膜聯(lián)蛋白 V）是一種分子量為35-36 kDa的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力結(jié)合，將Annexin V 進(jìn)行熒光素FITC標(biāo)記，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
碘化丙啶（Propidium, PI）是一種可與DNA結(jié)合的染料，它不能透過正常細(xì)胞或早期凋亡細(xì)胞的完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI 能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核紅染。
實(shí)驗(yàn)操作步驟
胞凋亡流程.png)
注意事項(xiàng)
1、誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)間要準(zhǔn)確。
2、AnnexinV是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)要注意避光。
3、細(xì)胞凋亡是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程，反應(yīng)一小時(shí)后熒光強(qiáng)度就開始衰變，熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞時(shí)，由于熒光易碎滅，觀察時(shí)要盡量快。
4、整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔，切勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作。
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