平臺(tái)_13.png)
實(shí)驗(yàn)概念：免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescence technique ）又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)。免疫熒光通過(guò)抗體與示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)，進(jìn)而對(duì)抗原所在的細(xì)胞或組織進(jìn)行定性或定量。
實(shí)驗(yàn)中心：江蘇瀚江生物
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、細(xì)胞爬片
用鑷子夾住撥片的一角，在火上烘烤后，置于6孔板中，先加入少許細(xì)胞完全培養(yǎng)基(防止撥片在加入細(xì)胞懸液后漂浮)，加入合適的細(xì)胞密度的細(xì)胞懸液，置于 37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h左右使細(xì)胞貼壁
2、細(xì)胞固定
從細(xì)胞培養(yǎng)箱中取出已爬好片的孔板，PBS洗滌3次，每次室溫靜置5 min,吸去剩余的 PBS,每孔中加入 4%多聚甲醛1ml,室溫靜置 20 min;
3、細(xì)胞通透處理
吸掉固定液，用PBS洗滌3次，每次靜置5min，每孔加入0.5%Triton-100 溶液1ml，室溫放置 20 min;(定位在細(xì)胞膜上的蛋白，這步省略)
4、封閉
吸掉孔板中的0.5%Triton-100溶液，PBS洗滌3次，每次靜置5min,吸掉PIS，每孔中加入1m1%BSA封閉液封閉，室溫封閉30min;
5、一抗處理
吸掉孔板中的封閉液，用1%BSA稀釋相對(duì)應(yīng)得一抗，可取出玻片(含有細(xì)胞面朝上)，加入一抗，覆蓋玻片表面(注意不要加多，利用液體的張力使一抗液體不溢出玻片外)，將玻片放入濕盒中，4℃過(guò)夜;
6、二抗處理
從濕盒中取出玻片置于6孔板中，用P3ST洗滌3次，每次靜置5min，用1%BSA稀釋對(duì)應(yīng)種屬的二抗。加入二抗，蓋玻片表面(注意不要加多,利用液體的張力使一抗液體不溢出玻片外),將玻片放入濕盒中,37℃孵育30min;(加入二抗起，所有操作均需避光)
7、核復(fù)染:
將玻片咒于6孔板中，用PBST洗滌3次，每次靜置5min，加入DAPI染液，空溫避光孵育5~10min;
觀察拍照:用PBST洗滌3次，每次靜置5min，每孔加入PBS，盡快用熒光8、顯微鏡觀察拍照。
注:1%BSA用PBS配制:PBST:0.02%Twecn-20加入到PBS中。
套餐內(nèi)容：包埋+切片2片+染色2片+抗體費(fèi)+拍照
*抗體費(fèi)需要根據(jù)抗體庫(kù)中是否有該抗體而定
掃碼關(guān)注公眾號(hào)